GLICOSE Liquiform Ref.

: 133
Instruções de Uso MS 10009010236

(
Finalidade . Sistema enzimático para a determinação da glicose no Metodologia . GOD-Trinder.
sangue, líquor e líquidos ascítico, pleural e sinovial por método cinético
ou de ponto final. Reagentes
Uso profissional. 1. - Reagente 1 - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Contém tampão fosfato 30 mmo/L, pH 7,5; fenol ³1 mmol/L; glicose

<
[Somente para uso diagnóstico in vitro.]
oxidase ³12500 U/L; peroxidase ³800 U/L; 4-aminoantipirina
³290 mmol/L; azida sódica 7,5 mmol/L; e surfactantes.
Princípio . A glicose oxidase catalisa a oxidação da glicose de acordo
com a seguinte reação:
2. - Padrão calibrador - Armazenar entre 2 - 30 ºC.
Contém: glicose 100 mg/dL e biocida não tóxico. Após o manuseio
GOD sugere-se armazenar bem vedado para evitar evaporação.
Glicose + O2 + H2O Ácido Glucônico + H2O2
O estabilizador do padrão pode precipitar em baixas temperaturas, o que
não interfere em seu desempenho.
O peróxido de hidrogênio formado reage com 4-aminoantipirina e fenol,
sob ação catalisadora da peroxidase, através de uma reação oxidativa de Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições
acoplamento formando uma antipirilquinonimina vermelha cuja indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo.
intensidade de cor é proporcional à concentração da glicose na amostra. Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos à contaminações de
natureza química e microbiana que podem provocar redução da
estabilidade.
POD
2H2O2 + 4-Aminoantipirina + fenol Antipirilquinonimina + 4H2O
Precauções e cuidados especiais
Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na
Características do sistema . O reagente é apresentado pronto manipulação do reagente.
para uso e utiliza metodologia enzimática de grande especificidade
analítica, de simples e fácil aplicação no laboratório clínico. O Reagente contém azida sódica que é tóxica. Deve-se tomar cuidado
para evitar a ingestão e no caso de contato com os olhos, deve-se lavar
A Labtest desenvolveu o sistema Glicose Liquiform otimizando as imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio
concentrações de enzimas do reagente visando fornecer o melhor médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com
desempenho analítico e maior estabilidade. tubulações de chumbo e cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de
água para descartar o reagente.
Os dados de repetitividade e reprodutibilidade obtidos com o sistema
Glicose Liquiform demonstram que o método é capaz de fornecer Não utilizar o Reagente 1 quando sua absorbância medida contra a água
resultados que superam as metas de desempenho para as medidas de em 505 nm for igual ou maior que 0,300 ou quando mostrar-se turvo ou
glicose estabelecidas pela American Diabetes Association (ADA). A com sinais de contaminação.
comparação entre as imprecisões encontradas na repetitividade e na
reprodutibilidade demonstra que o sistema de medição é bastante Materiais necessários e não fornecidos
robusto nas regiões de concentrações significativas para uso clínico,
indicando que tem um desempenho muito estável no dia a dia. 1. Banho-maria mantido à temperatura constante ( 37 ºC ).
O sistema permite que a determinação seja realizada em método cinético
2. Fotômetro capaz de medir com exatidão a absorbância entre 490 e
de tempo fixo obtendo-se resultados em apenas 90 segundos de reação e 520 nm.
também em método de ponto final, que proporciona mais agilidade para 3. Pipetas para medir amostras e reagente.
determinados analisadores bioquímicos. 4. Cronomêtro.
O método pode ser utilizado em técnica manual e é facilmente aplicável
em analisadores semiautomáticos e automáticos capazes de medir com
exatidão a absorbância entre 490 e 520 nm.

01 Português - Ref.: 133

Influências pré-analíticas . Por ser uma substância com Interferências
característica redutora o ácido ascórbico impede a formação do
cromógeno levando a obtenção de resultados falsamente diminuídos. Método de ponto final . Concentrações de bilirrubina até
Pacientes que fazem uso de ácido ascórbico (Cebion Ò, Energil C Ò, 2,5 mg/dL e hemoglobina até 200 mg/dL não produzem interferências
Redoxon Ò, dentre outros) devem ser aconselhados a interromper seu significativas. Concentrações de bilirrubina maiores que 2,5 mg/dL
9
uso por 24 horas antes da realização do exame . produzem interferências negativas.

Nas 24 horas que sucedem a ingestão aguda de álcool ocorre Concentrações de triglicérides até 1000 mg/dL não produzem
significativa redução da glicemia. As reduções podem também ser interferência significativa quando se utiliza branco de amostra.
significativas nos indivíduos submetidos a jejum prolongado ou em
obesos tratados com dietas com baixo valor calórico3. Para avaliar a concentração aproximada da hemoglobina em uma
amostra hemolisada pode-se proceder do seguinte modo: diluir 0,05 mL
Pacientes diabéticos em uso continuado de clorpropamida podem da amostra em 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85 %) e medir a
desenvolver hipoglicemias importantes que são muito difíceis de corrigir. absorbância em 405 ou 415 nm, acertando o zero com água deionizada
ou destilada.
A Variação Biológica intraindividual da glicose é 5,7 % e a Variação
Biológica intragrupo é 6,9 %4. Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbância405 x 601
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbância415 x 467
Amostra
Branco da amostra . Este procedimento é aplicável quando houver
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) para ação positiva de interferentes. Misturar 1,0 mL de NaCl 150 mmol/L
colheita, preparação e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os (0,85 %) com 0,01 mL da amostra. Medir a absorbância em 505 nm,
erros devidos à amostra podem ser muito maiores que os erros ocorridos acertando o zero com água destilada ou deionizada. Diminuir a
durante o procedimento analítico. absorbância assim obtida, da absorbância do teste e calcular a
concentração.
A amostra de sangue deve ser obtida após jejum de no mínimo 8 horas ou
em menor tempo de acordo com recomendação médica. Método cinético . Concentrações de bilirrubina até 2,5 mg/dL,
hemoglobina até 200 mg/dL e triglicérides até 1000 mg/dL não produzem
Usar plasma ou soro tomando as precauções a seguir:
Realizar a colheita do sangue utilizando um anticoagulante contendo um interferências significativas.
inibidor da glicólise. O uso do anticoagulante Glistab (Labtest Ref. 29)
permite a colheita de uma só amostra para as dosagens de creatinina, Procedimento
glicose e ureia.
Método de ponto final . Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como
As amostras de sangue não contendo antiglicolítico devem ser a seguir:
centrifugadas imediatamente após a colheita, e o plasma ou soro
separados das células ou coágulo.
Branco Teste Padrão
Em outros líquidos biológicos (líquor e líquidos ascítico, pleural e sinovial) Amostra 0,01 mL
adicionar anticoagulante contendo antiglicolítico na mesma proporção Padrão 0,01 mL
usada para a amostra de sangue, e centrifugar antes de iniciar a Reagente 1 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
medição6.
Misturar vigorosamente e incubar em banho-maria a 37 ºC durante 10
Nas amostras de sangue tratadas com antiglicolítico a concentração da
minutos. O nível da água no banho deve ser superior ao nível dos
glicose permanece estável até 8 horas. No plasma, soro e outros líquidos
reagentes nos tubos de ensaio. Determinar as absorbâncias do Teste e
separados das células, a glicose permanece estável 3 dias entre 2 - 8 ºC,
Padrão em 505 nm (490 a 520), acertando o zero com o branco. A cor é
quando não ocorre contaminação bacteriana e fúngica6.
estável 30 minutos.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue
O procedimento sugerido para a medição é adequado para fotômetros
não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como
cujo volume mínimo de solução para medição é igual ou menor que
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las deve-se seguir as
1,0 mL. Deve ser feita uma verificação da necessidade de ajuste do
normas estabelecidas para biossegurança.
volume para o fotômetro utilizado.
Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos aplicar as
Os volumes de amostra e reagente podem ser modificados
normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental.
proporcionalmente sem prejuízo para o desempenho do teste e o
procedimento de cálculo se mantém inalterado. Em caso de redução dos
volumes é fundamental que se observe o volume mínimo necessário para
a leitura fotométrica. Volumes da amostra menores que 0,01 mL são
críticos em aplicações manuais e devem ser usados com cautela porque
aumentam a imprecisão da medição.

02 Português - Ref.: 133

Cálculos . Ver linearidade. Exemplo
Absorbância do Teste A 30 Teste = 0,104 A 30 Padrão = 0,095
Glicose (mg/dL) = x 100 A 90 Teste = 0,181 A 90 Padrão = 0,178
Absorbância do Padrão
0,181 - 0,104
Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a Glicose (mg/dL) = x 100 = 93
metodologia, o resultado também pode ser obtido utilizando fator de 0,178 - 0,095
calibração.
Calibração . O padrão é rastreável ao Standard Reference Material
100 (SRM) 917 do National Institute of Standards and Technology (NIST).
Fator de Calibração =
Absorbância do Padrão Calibrações manuais
Obter o fator de calibração ao usar novo lote de reagentes ou quando o
Glicose (mg/dL) = Absorbância do Teste x Fator de Calibração controle interno da qualidade indicar.

Exemplos Sistemas automáticos

Branco de reagentes: água ou solução de cloreto de sódio 150 mmol/L
Os dados apresentados a seguir são ilustrativos. (0,85 %);
Padrões: usar calibradores proteicos. A concentração de glicose no
Absorbância do Teste = 0,362 calibrador da linha Calibra - Labtest é rastreavel ao SRM 917 do NIST.
Absorbância do Padrão = 0,340
Intervalo de calibrações
0,362 Calibração do branco ao usar novo frasco de reagente;
Glicose (mg/dL) = x 100 = 106 Calibração de 2 pontos ao mudar de lote;
0,340 Calibração de 2 pontos quando o controle interno da qualidade indicar.
ou
100
Fator de Calibração = = 294 Linearidade
0,340
O resultado da medição é linear até 500 mg/dL. Quando for obtido valor
Glicose (mg/dL) = 0,362 x 294 = 106 igual ou maior que 500 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L,
realizar nova medição e multiplicar o resultado obtido pelo fator de
diluição. Sugerimos a verificação da linearidade metodológica e
Método cinético . Deve ser utilizado em todas as amostras
fotométrica, no mínimo semestralmente utilizando amostra com valores
lipêmicas. O procedimento utiliza uma cinética de 2 pontos e não requer o
até 500 mg/dL.
branco da reação. O controle da temperatura é absolutamente
indispensável para a reprodutibilidade dos resultados. É fundamental
também que as operações com amostras e padrões sejam realizadas
Controle interno da qualidade . O laboratório deve manter um
mantendo-se rigorosamente constante o intervalo de tempo entre a programa de controle interno da qualidade que defina claramente os
mistura da amostra ou padrão com o reagente e o início da medição no objetivos, procedimentos, normas, critérios para limites de tolerância,
fotômetro. Como o tempo de reação é muito pequeno, é necessário ações corretivas e registro das atividades. Materiais de controle devem
utilizar um fotômetro que tenha controle de temperatura a 37 ºC na cubeta ser utilizados para monitorar a imprecisão da medição e desvios da
(cubeta termostatizada). calibração. Sugere-se que as especificações para o coeficiente de
variação e erro total sejam baseadas nos componentes da Variação
Acertar o zero do fotômetro em 505 nm (490 a 520) com água destilada Biológica (VB).
ou deionizada. Adicionar 0,01 mL da amostra ou Padrão a 1,0 mL do
Reagente 1 previamente aquecido a 37 ºC. Misturar e iniciar Sugere-se utilizar os produtos da linha Qualitrol - Labtest para controle
imediatamente a medida fotométrica. Realizar uma medição da interno da qualidade em ensaios de química clínica.
absorbância aos 30 segundos e outra medição aos 90 segundos
mantendo a reação com temperatura controlada em 37 ºC. Intervalo de referência . Os intervalos devem ser usados apenas
como orientação. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça sua
Cálculos própria faixa de valores de referência na população atendida.

DA (Teste ou Padrão) = Absorbância90 - Absorbância30 Plasma (jejum de 8 horas)

Idade mg/dL
DA do Teste
Prematuro 20 a 60
Glicose (mg/dL) = x 100
0 a 1 dia 40 a 60
DA do Padrão
> 1 dia 50 a 80
Crianças e Adultos 65 a 99

03 Português - Ref.: 133

Os critérios para diagnóstico de pré-diabetes podem ser obtidos em: Reprodutibilidade - imprecisão total
American Diabetes Association. Diabetes Care 2006; (suppl 29):
N Média DP CV (%)
S43-S48.
Amostra 1 80 47 1,04 2,19
Líquor . 2/3 da glicemia quando a medição é realizada em amostras Amostra 2 80 129 1,47 1,82
colhidas simultaneamente. Amostra 3 80 194 1,88 1,66

Em indivíduos sadios, a pequena quantidade de líquido presente nas

cavidades articular, pleural e peritoneal é originada do ultrafiltrado do O erro total (erro aleatório + erro sistemático) estimado em
plasma. Portanto, pode-se considerar que, praticamente, a glicose ali concentrações iguais a 45 mg/dL, 120 mg/dL e 180 mg/dL é igual a
presente está na mesma concentração do plasma. 6,17 %, 4,32 % e 4,83 %, respectivamente.

Os resultados indicam que o método atende a especificação desejável

Conversão . Unidades convencionais (mg/dL) x 0,0556 = Unidades
para o erro total (£6,9 %) baseada nos componentes da Variação
SI ( mmol/L)
Biológica.
Características do desempenho12 Sensibilidade metodológica . Uma amostra proteica contendo
44 mg/dL de glicose foi utilizada para calcular o limite de detecção do
Exatidão . Em duas amostras com concentrações de glicose iguais a ensaio tendo sido encontrado um valor igual a 1,77 mg/dL, equivalente à
78 e 150 mg/dL foram adicionadas quantidades diferentes do analito,
3 vezes o desvio padrão das replicatas da amostra. Utilizando-se a
obtendo-se no método de ponto final recuperações entre 98 e 99 %.
absorbância do padrão como parâmetro, o limite de detecção fotométrica
O erro sistemático proporcional médio obtido em um valor de 120 mg/dL
é 0,28 mg/dL correspondendo a uma absorbância igual a 0,001.
é igual a 1,8 mg/dL ou 1,5 %.
Efeitos da diluição da matriz . Duas amostras com valores
Especificidade . O método proposto foi comparado com um método iguais a 634 e 625 mg/dL foram utilizadas para avaliar a resposta do
similar apresentando os resultados abaixo:
sistema nas diluições da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85 %).
Utilizando fatores de diluição que variaram de 2 a 8 foram encontradas
Método recuperações entre 95 e 99 %.
Método Labtest
Comparativo
Número de amostras 40
Significado clínico . Valores elevados de glicose ocorrem nos
Intervalo de vários tipos de diabetes primárias, nos estados de intolerância à glicose e
44 - 606 mg/dL nas diabetes secundárias à várias doenças (hipertireoidismo,
concentrações (mg/dL)
Método Labtest (mg/dL) = 0,9637 x hiperpituitarismo, hiperadrenocorticismo, etc.).
Equação da regressão
Comparativo + 2,8
Valores diminuídos de glicose ocorrem nas hipoglicemias que podem ser
Coeficiente de correlação 0,999
devidas a várias causas. Quando a ocorrência de sintomas de
hipoglicemia é relacionada à alimentação, duas formas de hipoglicemia
podem ser definidas: hipoglicemia do jejum e pós-prandial.
Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático total (constante e
proporcional) verificado no limite de decisão (120 mg/dL) foi igual a As causas mais comuns de hipoglicemia do jejum são: hiperinsulinismo
1,58 mg/dL ou 1,32 %.O erro total obtido no mesmo nível de decisão é endógeno (insulinoma e sulfonilurea), hiperinsulinismo exógeno
4,32 %. Os resultados do estudo comparativo atendem à especificação (factício), tumores extrapancreáticos, síndrome autoimune (formação
para Erro Sistemático Total de 6,9 % para a Variação Biológica. espontânea de anticorpos para receptores da insulina), insuficiência
suprarrenal e ou hipofisária, doença hepática grave e alcoolismo.
Como as amostras foram selecionadas aleatoriamente em pacientes de
ambulatório e pacientes hospitalizados, pode-se inferir que o método tem A hipoglicemia pós-prandial dependendo da história clínica e da resposta
uma especificidade metodológica adequada e atende aos requisitos ao teste oral de tolerância à glicose, é classificada em hipoglicemia
especificados pela American Diabetes Association (ADA)5. alimentar, hipoglicemia do diabético tipo II e do paciente com intolerância
à glicose, hipoglicemia funcional ou reativa.
Estudos de precisão . Os estudos de precisão foram realizados
utilizando 80 amostras com concentrações médias iguais a 47, 129 e Para uma revisão dos critérios diagnósticos e classificação do diabetes
194 mg/dL. mellitus consultar American Diabetes Association. Diabetes Care
2012;(suppl): 1 S64-S71 ou:
Repetitividade - imprecisão intraensaio http://care.diabetesjournals.org/content/35/Supplement_1/S64.full
(acesso em 16/04/2012).
N Média DP CV (%)
Amostra 1 80 47 0,60 1,25
Amostra 2 80 129 1,86 1,08
Amostra 3 80 194 2,81 0,62

04 Português - Ref.: 133

A redução da concentração de glicose nos líquidos corporais encontra-se 6. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia: W.B.
usualmente relacionada a processos inflamatórios ou infecciosos. A Saunders, 1970:154-166.
determinação da concentração de glicose no líquor representa um dos
parâmetros para a distinção entre meningite bacteriana e virótica, porém 7. Tonks DB Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcot
tendo sensibilidade inferior à avaliação da celularidade no mesmo Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,
material. 1972.

8. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-
Observações
501.
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores 9. Martinello F, Silva E.L. Interferência do ácido ascórbico nas
fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados determinações de parâmetros bioquímicos séricos: estudos in vivo e
corretos. in vitro. Jorn. Bras. Pat. Med. Lab, 2003;39:323-334.

2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e 10. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa Diagnóstica 2005.
potencial de erros analíticos. A água utilizada no laboratório deve ter a
qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes, 11. Burtis CA, Ashwood ER. Textbook of Clinical Chemistry, 2a. edição,
usar nas medições e para uso no enxágue final da vidraria, a água deve ter Philadelphia: W.B. Saunders, 1986:2175-2211.
resistividade ³1 megaohm.cm ou condutividade £1 microsiemens/cm e
12. Labtest: Dados de Arquivo.
concentração de silicatos <0,1 mg/L. Quando a coluna deionizadora está
com sua capacidade saturada ocorre liberação de vários íons, silicatos e
substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram
Apresentação
os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados
de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de Produto Referência Conteúdo
controle da qualidade da água. 1 1 x 500 mL
133-1/500
1 x 5 mL
3. Várias publicações demonstram que a urina contém numerosas Glicose Liquiform
1 2 x 500 mL
substâncias, principalmente o ácido úrico, que interferem nos métodos 133-2/500
1 x 5 mL
utilizando a reação GOD-POD, levando a resultados falsamente
diminuídos.
Estão disponíveis aplicações para sistemas automáticos e
Referências semiautomáticos.

1. Bergmeyer HU. Methods of Enzimatic Analysis, 3a. edição, Vol VI, O número de teste em aplicações automáticas depende dos
Deerfield Beach:VCH, 1986:178-184. parâmetros de programação.

2. Blaedel WJ, Uhl JM. Clin Chem 1975;21:119-124.

Informações ao consumidor
3. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory
Tests, 1a. edição, Washington: AACC Press, 1993. [Termos e Condições de Garantia]

4. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto, dentro das
Molecular, Base de Datos de Variación Biológica. Disponível especificações, até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que
em:<http://www.seqc.es/ar ticle/ar ticleview/330/1/170> os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e
(acesso em 08/2006). nestas instruções sejam seguidos corretamente.

5. Sachs DB, Bruns DE, Goldstein DE, Maclaren NK, McDonald JM, Parrot
M. Clin Chem 2002;48:436-72.

Labtest Diagnóstica S.A.

CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
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Edição: Dezembro, 2011 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.

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