HbA1c

Glycated Hemoglobin
Latex turbidimetry

Quantitative determination of glycated hemoglobin (HbA 1c) in B B

CALCULATIONS
human blood UHbAU1BU c concentration (%)
IVD Plot (ABB) obtained against the HbA1B1c concentration of each calibrator (1 to 4 Level). HbAB1c
percentage in the sample is calculated by interpolation of its absorbance (AB) in the
Store 2 - 8ºC. calibration curve.
PRINCIPLE OF THE METHOD QUALITY CONTROL
This method utilizes the interaction of antigen and antibody to directly determine the HbAB1c Control (ref: 43106) is recommended to monitor the performance of manual and
HbA1c in whole blood. Total hemoglobin and HbAB1c have the same unspecific absorption automated assay procedures. Controls require hemolysis pretreatment after being
rate to latex particles. When mouse antihuman HbAB1c monoclonal antibody is added reconstituted.
(R2), latex-HbA1c-mouse anti human HbAB1c antibody complex is formed. Agglutination is Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions
formed when goat anti-mouse IgG polyclonal antibody interacts with the monoclonal if controls do not meet the acceptable tolerances.
antibody. The amount of agglutination is proportional to the amount of HbA 1c absorbed
on to the surface of latex particles. The amount of agglutination is measured as REFERENCE VALUES11
absorbance. The HbAB1c value is obtained from a calibration curve. Recommended Values: less than 6% for a non-diabetic, less than 7% for glycemic control
of a person with diabetes.
CLINICAL SIGNIFICANCE P Each laboratory should establish its own expected values. In using Hemoglobin A 1c to
Throughout the circulatory life of the red cell, Hemoglobin A1c is formed continuously by monitor diabetic patients, results should be interpreted individually. That is, the patient
the adduction of glucose to the N-terminal of the hemoglobin beta chain. This process, should be monitored against him or herself. There is a 3-4 week time lag before
which is non-enzymatic, reflects the average exposure of hemoglobin to glucose over an Hemoglobin A1c reflects changes in blood glucose level.
extended period. In a classical study, Trivelli et al1 showed Hemoglobin AB1c in diabetic
subjects to be elevated 2-3 fold over the levels found in normal individuals. Several PERFORMANCE CHARACTERISTICS
investigators have recommended that Hemoglobin A1c serve as an indicator of metabolic Measuring range: From detection limit of 2% to linearity limit of 16%.
control of the diabetic, since Hemoglobin A1c levels approach normal values for diabetics Precision:
in metabolic control.2,3,4 Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Hemoglobin A1c has been defined operationally as the “fast fraction” hemoglobins (Hb1A, Mean (%) 5,95 12,15 5,97 12,21
A1B, A1c) that elute first during column chromatography with cation-exchange resins. The
SD 0,19 0,18 0,14 0,15
non-glycosylated hemoglobin, which consists of the bulk of the hemoglobin has been
designated HbA0. The present procedure utilizes an antigen and antibody reaction to CV (%) 3,20 1,47 2,31 1,24
directly determine the concentration of the HbAB1c. Sensitivity: 1% = 0,056 (A)
Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show differences
REAGENTS when compared with other commercial reagent (x). The results obtained using 40
samples were the following:
R1 Latex 0,13%, Buffer, stabilizer. Correlation coefficient (r)2 0,995
Mouse anti-human HbA1c monoclonal antibody 0,05mg/ml, Regression equation: y= 0,989x -0,047
R2 goat anti-mouse IgG polyclonal antibody 0,08mg/dl, Buffer, The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
stabilizers. INTERFERENCES
R3 (Hemolysis reagent) Water and stabilizers 1. Bilirubin to 50 mg/dL, ascorbic acid to 50 mg/dL, triglycerides to 2000 mg/dL,
carbamylated Hb to 7,5 mmol/L and acetylated Hb to 5,0 mmol/L do not interfere in
Ref: 43105 HbAB1c CALIBRATOR. (4 levels). this assay.
Optional
Ref: 43106 HbAB1Bc CONTROL. (2 levels). 2. It has been reported that results may be inconsistent in patients who have the
following conditions: opiate addiction, lead-poisoning, alcoholism, ingest large
PRECAUTIONS
doses of aspirin.6, 7, 8, 9
All human specimens should be regarded as potentially biohazardous. Therefore,
3. It has been reported that elevated levels of HbF may lead to underestimation of
universal precautions should be used in specimen handling (gloves, lab garments, avoid
HA1c and, that uremia does not interfere with HbAB1c determination by
aerosol production, etc.).
immunoassay.10 It has been reported that labile intermediates (Schiff base) are not
detected and therefore, do not interfere with HbAB1c determination by immunoassay.5
PREPARATION
4. It has been determined that Hemoglobin variants HbA2, HbC and HbS do not
R1, R2 and R3 are ready to use. Mix gently before use.
interfere with this method.
5. Other very rare variants of hemoglobin (e.g. HbE) have not been assessed.
STORAGE AND STABILITY
All the components of the kit are stable until the expiration date on the label when stored
NOTES
tightly closed at 2-8ºC and contaminations are prevented during their use. Do not use
1. In order to avoid contamination, it is recommended to use disposable material.
reagents over the expiration date.
R1 and R2 are stable for at least one month after opening stored at 2-8°C. 2. Use clean disposable pipette for its dispensation.
Reagent deterioration: Alterations in the physical appearance of the reagents or values 3. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
of control materials outside of the manufacturer’s acceptable range may be an indication
of reagent instability. BIBLIOGRAPHY
1. Trivelli, L.A., Ranney, H.M., and Lai, H.T., New Eng. J. Med. 284,353 (1971).
ADDITIONAL EQUIPMENT 2. Gonen, B., and Rubenstein, A.H., Diabetologia 15, 1 (1978).
- Thermostatic bath at 37ºC. 3. Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F., and Gallop, P.M.,
- Spectrophotometer or photometer thermostatable at 37ºC with a 660 nm filter. J. Clin. Endocrinol. Metab. 44, 859 (1977).
- General laboratory equipment (Note 1) 4. Bates, H.M., Lab. Mang., Vol 16 (Jan. 1978).
5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders
SAMPLES Company, p.794-795 (1999).
Special preparation of the patient is unnecessary. Fasting specimens are not required. 6. Ceriello, A., et al, Diabetologia 22, p. 379 (1982).
No special additives or preservatives other than anticoagulants are required. Collect 7. Little, R.R., et al, Clin. Chem. 32, pp. 358-360 (1986).
venous blood with EDTA using aseptic technique. HbAB1c in whole blood collected with 8. Fluckiger, R., et al, New Eng.J. Med. 304 pp. 823-827 (1981).
EDTA is stable for one week at 2-8°C5. 9. Nathan, D.M., et al, Clin. Chem. 29, pp. 466-469 (1983).
To determine HbA1c, a hemolysate must be prepared for each sample: 10. Engbaek, F., et al, Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989).
1. Dispense 1 mL Hemolysis Reagent into tubes labeled: Calibrator, Control, 11. American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations (Position
Patients, etc. Note: Plastic or glass tubes of appropriate size are acceptable. Statement). Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001).
2. Place 20 µL of well mixed whole blood into the appropriately labeled lyse reagent
tube. Mix. PACKAGING
3. Allow to stand for 5 minutes or until complete lysis is evident. Hemolysates may be
Cont. Ref. 43099 Ref: 43100 Ref: 43101
stored up to 10 days at 2-8°C.
R1: 1x15 mL 1 x 30 mL 1 x 90 mL
PROCEDURE
R2: 1x5 mL 1 x 10 mL 1 x 30 mL
1. Assay conditions:
Wavelength: 660 nm (600 - 660) R3 : 1x60 mL 1 x 125 mL 4 x 125 mL
Temperature: 37ºC
Cuvette ligth path: 1 cm
2. Adjust the instrument to zero with distilled water.
3. Pipette into a cuvette: (Note 2)
R1 (µL) 360
CalibratorP or sample (µL) 10
4. Mix and incubate 5 minutes.
5. Pippete into the cuvette:
R2 (µL) 120
6. Mix and read the absorbance after 5 minutes (ABB) of the R2 addition.

TLIS50-I 29/09/20 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com
 HbA1c

Hemoglobina Glicosilada
Turbidimetría Látex

Determinación cuantitativa de la hemoglobina glicosilada (HbA1 c) B B

5. Pipetear en la misma cubeta:
en sangre humana R2 (µL) 120
IVD 6. Mezclar y leer la absorbancia (A) a los 5 minutos de la adición del Reactivo R2.
Conservar a 2 - 8ºC.
CALCULOS
PRINCIPIO DEL MÉTODO
UCConcentración HbAUBU1CBUc (%)
Este método utiliza la interacción de antígeno y anticuerpo para determinar directamente
Representar la absorbancia (A) obtenida frente a las concentraciones de HbA1c de cada
HbA1c en sangre total. La hemoglobina total y HbA1c tienen la misma absorción
Calibrador (del 1 al 4). El porcentaje de HbA1c en la muestra se calcula por interpolación
inespecífica para las partículas de látex. Cuando se añade el anticuerpo monoclonal anti-
de su absorbancia (A) en la curva de calibración.
HbA1c (ratón) (R2), se forma el complejo latex- HbA1c- anticuerpo HbA1c de ratón. Se
produce aglutinación cuando el anticuerpo policlonal IgG de cabra anti-ratón interacciona CONTROL DE CALIDAD
con el anticuerpo monoclonal. La cantidad de aglutinación es proporcional a la cantidad Se recomienda utilizar sueros control para controlar los ensayos tanto en procedimiento
de HbA1c absorbida en la superficie de las partículas de látex. La cantidad de manual como en automático. Spinreact dispone de sueros control HbA1c (Ref: 43106).
aglutinación se mide como absorbancia. El valor de HbA1c se obtiene de la curva de Los Controles, una vez reconstituidos, precisan de un tratamiento hemolizante
calibración. antes de su uso.
Cada laboratorio debería establecer su propio Control de Calidad y establecer
SIGNIFICADO CLÍNICO correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias exigidas.
A lo largo de la vida circulatoria de los hematíes, se forma continuamente hemoglobina
A1c, por la adición de glucosa al grupo N- terminal de la cadena beta de la hemoglobina. VALORES DE REFERENCIA11
Este proceso, que es no –enzimático, refleja la exposición media de hemoglobina a Valores recomendados: inferior a 6% para no-diabéticos, inferior a 7% para control
glucosa durante un periodo prolongado. En un estudio clásico, Trivelli et al1 mostró que glicémico de persona con diabetes.
la Hemoglobin A1c se incrementa 2-3 veces en individuos con diabetes en comparación Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. En
con individuos normales. Varios investigadores han recomendado que Hemoglobina A1c el uso de Hemoglobina A1c para el control de pacientes diabéticos, los resultados se
sirve como indicador del control metabólico de diabéticos, ya que los niveles de deben interpretar individualmente. Significa que el paciente se debe controlar frente a él
Hemoglobina A1C alcanzan valores normales para diabéticos en control metabólico. 2,3,4 mismo. Hay un intervalo de tiempo de 3-4 semanas antes que Hemoglobina A1c refleje
La Hemoglobina A1C se ha definido como la ‘fracción rápida’ de hemoglobina (Hb1A, cambios en el nivel de glucosa en sangre.
A1B, A1c) que eluye la primera en una cromatografía de columna con resinas de
intercambio catiónico. La hemoglobina no-glicosilada, que consiste en la mayor parte de CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
hemoglobina, se ha designado como HbA0. Este procedimiento utiliza una reacción Rango de medida: Desde el límite de detección de 2% hasta el límite de linealidad de
antígeno-anticuerpo para determinar directamente la concentración de HbA1c. 16%.
Precisión:
REACTIVOS Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
Media (%) 5,95 12,15 5,97 12,21
R1 Latex 0,13%, Tampón, estabilizante. SD 0,19 0,18 0,14 0,15
Anticuerpo monoclonal anti-HbA1c (ratón) 0,05 mg/mL, CV (%) 3,20 1,47 2,31 1,24
R2 anticuerpo policlonal IgG de cabra anti-ratón 0,08 mg/dL, Sensibilidad analítica: 1% = 0,056 (A)
tampón, estabilizantes. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
R3 (Reactivo hemolizante) Agua y estabilizantes Los resultados obtenidos con 40 muestras fueron los siguientes:
Ref: 43105 HbAB1Bc CALIBRADOR (4 niveles). Coeficiente de correlación (r)2: 0,995
Opcional Ecuación de la recta de regresión: y=0,989x - 0,047
Ref: 43106 HbAB1Bc CONTROL. (2 niveles)
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
PRECAUCIONES
Todas las muestras humanas se deben tratar como potencialmente biopeligrosas. Por INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES
tanto se deben usar las precauciones universales de tratamiento de muestras (guantes, 1. Bilirrubina hasta 50 mg/dL, ácido ascórbico hasta 50 mg/dL, triglicéridos hasta 2000
vestimenta de laboratorio, evitar producción de aerosoles, etc.) mg/dL, Hb carbamilada hasta 7,5 mmol/L y Hb acetilada hasta 5,0 mmol/L no
interfieren en el ensayo.
PREPARACION 2. Los resultados pueden ser inconsistentes en pacientes con las siguientes
R1, R2 y R3 están listos para su uso. Mezclar suavemente antes de usar. condiciones: adicción de opiáceos, envenenamiento por plomo, alcoholismo,
grandes ingestas de aspirina..6, 7, 8, 9
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD 3. Se ha demostrado que valores elevados de HbF pueden conducir a una
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el infravaloración de HA1c, y que la uremia no interfiere con la determinación de HbA1c
envase cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, y se evita la por inmunoensayo.10 También se ha demostrado que intermedios lábiles (base
contaminación durante su uso. No utilizar reactivos que hayan sobrepasado la fecha de Schiff) no son detectados y no interfieren con la determinación de HbA1C por
caducidad. inmunoensayo.5
R1 y R2 una vez abiertos son estables durante al menos 1 mes si se conservan a 2- 4. Se ha determinado que las variantes de Hemoglobina HbA2, HbC y HbS no
8ºC. interfieren con este método.
Indicadores de deterioro de los reactivos: Alteraciones en el aspecto físico de los 5. No se han evaluado otras variantes raras de hemoglobina (ej. HbE).
reactivos o valores de los controles fuera del rango establecido.
NOTAS
MATERIAL ADICIONAL 1. Para evitar la contaminación, se recomienda el uso de material desechable.
- Baño de agua a 37ºC. 2. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
- Espectrofotómetro o fotómetro con cubeta termostatizable a 37ºC para lecturas a 660 3. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
nm. reactivo en distintos analizadores.
- Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 1).
MUESTRAS BIBLIOGRAFIA
No es necesaria una preparación especial del paciente, ni condiciones de alimentación 1. Trivelli, L.A., Ranney, H.M., and Lai, H.T., New Eng. J. Med. 284,353 (1971).
específicas. No se requiere de otros aditivos ni conservantes especiales aparte de 2. Gonen, B., and Rubenstein, A.H., Diabetologia 15, 1 (1978).
anticoagulantes. Recoger la sangre venosa con EDTA usando técnicas asépticas. 3. Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F., and Gallop, P.M.,
J. Clin. Endocrinol. Metab. 44, 859 (1977).
HbA1c en sangre total recogida con EDTA es estable durante 1 semana a 2-8ºC.5
4. Bates, H.M., Lab. Mang., Vol 16 (Jan. 1978).
Para determinar HbA1c, se debe preparar un hemolizado para cada muestra:
1. Dispensar 1 mL de Reactivo hemolizante en tubos etiquetados: Calibrador, 5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders
Control, pacientes, etc. Nota: Son válidos tubos de plástico o vidrio de tamaño Company, p.794-795 (1999).
apropiado. 6. Ceriello, A., et al, Diabetologia 22, p. 379 (1982).
2. Colocar 20 µL de sangre total bien mezclada en el tubo correctamente etiquetado. 7. Little, R.R., et al, Clin. Chem. 32, pp. 358-360 (1986).
Mezclar. 8. Fluckiger, R., et al, New Eng.J. Med. 304 pp. 823-827 (1981).
9. Nathan, D.M., et al, Clin. Chem. 29, pp. 466-469 (1983).
3. Dejar reposar durante 5 minutos o hasta que sea evidente la lisis completa. Los
10. Engbaek, F., et al, Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989).
hemolizados se pueden conservar durante 10 días a 2-8°C.
11. American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations (Position
PROCEDIMIENTO Statement). Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001).
1. Condiciones de ensayo:
Longitud de onda: 660 nm (600 – 660) PRESENTACIÓN
Temperatura: 37ºC Cont. Ref. 43099 Ref: 43100 Ref: 43101
Paso de luz de la cubeta: 1 cm R1: 1x15 mL 1 x 30 mL 1 x 90 mL
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta (Nota 2). R2: 1x5 mL 1 x 10 mL 1 x 30 mL
R1 (µL) 360 R3 : 1x60 mL 1 x 125 mL 4 x 125 mL

Calibrador o muestra (µL) 10

4. Mezclar e incubar 5 minutos.

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 HbA1c

Hémoglobine glycosylée
Turbidimétrie Latex

Détermination quantitative de l'hémoglobine glycosylée (HbA1c) B B

4. Mélanger et incuber pendant 5 minutes à température ambiante.
dans le sang humain 5. Pipeter dans la même cuvette :
R2 (µL) 120
IVD
6. Mélanger et lire l'absorbance (A) 5 minutes après l'ajout du Réactif R2.
Conserver à 2 - 8 ºC CALCULS
UCConcentration HbAUBU1cC (%)
PRINCIPE DE LA MÉTHODE Représenter l'absorbance (A) obtenue par rapport aux concentrations de HbA1c de
Cette méthode utilise l'interaction entre l'antigène et l'anticorps, afin de déterminer chaque Calibrateur (du 1 au 4). Le pourcentage de HbA1c dans l'échantillon est calculé
directement la HbA1c totale dans le sang. L'hémoglobine totale et la HbA1c ont la même par interpolation de son absorbance (A) dans la cuve d'étalonnage.
absorption non spécifique pour les particules de latex. En cas d'ajout de l'anticorps
monoclonal anti-HbA1c(souris) (R2), un complexe latex - HbA1c - anticorps HbA1c de CONTRÔLE DE QUALITÉ
souris est formé. Une agglutination a lieu lorsque l'anticorps polyclonal IgG de chèvre anti- Il est recommandé d'utiliser des sérums de contrôle pour contrôler les essais aussi bien
souris interagit avec l'anticorps monoclonal. La quantité d'agglutination est proportionnelle lors de procédure manuel qu'automatique, Spinreact dispose de sérums de contrôles
à la quantité de HbA1c absorbée sur la surface des particules de latex. La quantité HbA1c (Réf : 43106). Les Contrôles, une fois reconstitués, requièrent un traitement
d'agglutination est mesurée comme absorbance. La valeur de HbA1c est obtenue à partir hémolysant avant leur utilisation.
de la courbe d'étalonnage. Chaque laboratoire doit établir son propre Contrôle de Qualité et des corrections en cas
de non-conformité des contrôles en termes de tolérances exigées.
SIGNIFICATION CLINIQUE
Tout au long de la vie circulatoire des hématies, de l'hémoglobine A1c est continuellement VALEURS DE RÉFÉRENCE11
formée en ajoutant du glucose au groupe N-extrême de la chaîne bêta de l'hémoglobine. Valeurs recommandées : inférieure à 6 % pour non-diabétiques, inférieure à 7 % pour
Ce processus, qui n’est pas enzymatique, reflète l'exposition moyenne de l'hémoglobine contrôle glycémique de personnes diabétiques.
au glucose au cours d'une période prolongée. Dans une étude classique, Trivelli et al1 a Chaque laboratoire devrait établir ses propres valeurs de référence. En cas d'utilisation
montré que l'hémoglobine A1c augmente de 2-3 fois chez les individus diabétiques par d'hémoglobine A1c pour le contrôle de patients diabétiques, les résultats doivent être
rapport aux individus normaux. Plusieurs chercheurs ont recommandé que l'hémoglobine individuellement interprétés. Ceci signifie que le patient doit être contrôlé par rapport à ses
A1c serve d'indicateur du contrôle métabolique de diabétiques, étant donné que les propres valeurs. Il existe un intervalle de temps de 3-4 semaines avant que l'hémoglobine
niveaux d'hémoglobine A1c atteignent des valeurs normales chez les diabétiques sous A1c ne reflète des variations du niveau de glucose dans le sang.
contrôle métabolique. 2.3.4
L'hémoglobine A1c a été définie comme la « fraction rapide » d'hémoglobine (Hb1A, A1B, CARACTÉRISTIQUES DE LA MÉTHODE
A1c) éluée la première dans une chromatographie sur colonne avec des résines Gamme de mesures: Depuis la limite de détection de 2% jusqu’à la limite de linéarité de
échangeuses de cations. L'hémoglobine non glycosylée, qui représente la plus grande 16%.
part d'hémoglobine, est désignée comme HbA0. Cette procédure utilise une réaction Précision:
antigène-anticorps, afin de déterminer directement la concentration de HbA1c. Intra-série (n= 20) Inter-série (n= 20)
Moyenne (mg/dL) 5,95 12,15 5,97 12,21
RÉACTIFS SD 0,19 0,18 0,14 0,15
R1 Latex 0,13 %, Tampon, stabilisant. CV (%) 3,20 1,47 2,31 1,24
Sensibilité analytique: 1 % = 0,056 A.
Anticorps monoclonal anti-HbA1c (souris) 0,05 mg/mL, Exactitude: Les réactifs SPINREACT (y) ne montrent pas de différences systématiques
R2 anticorps polyclonal IgG de chèvre anti-souris 0,08 mg/dL, significatives lorsqu’on les compare à d’autres réactifs commerciaux (x).
tampon, stabilisants. Les résultats obtenus avec 40 échantillons ont été les suivants:
R3 (Réactif hémolysant) Eau et stabilisants Coefficient de corrélation (r)2: 0,995.
Equation de la Coubre de régression: y=0,989x – 0,047.
Réf : 43105 HbA1c CALIBRATEUR. (4 niveaux)
En option Les caractéristiques de la méthode peuvent varier suivant l’analyseur employé.
Réf : 43106 HbA1c CONTRÔLE. (4 niveaux)
INTERFÉRENCES ET LIMITATIONS
PRÉCAUTIONS 1. La bilirubine jusqu'à 50 mg/dL l'acide ascorbique jusqu'à 50 mg/dL, les triglycérides
Tous les échantillons humains doivent être traités comme potentiellement biodangereux. jusqu'à 2000 mg/dL, la Hb carbamylée jusqu'à 7,5 mmol/L et la Hb acétylée jusqu'à
Il faut donc utiliser les précautions universelles de traitement d'échantillons (gants, 5,0 mmol/L n'interfèrent pas dans l'essai.
vêtements de laboratoire, éviter la production d'aérosols, etc.). 2. Les résultats peuvent être incohérents chez des patients avec les conditions
suivantes : dépendance aux opiacés, empoisonnement au plomb, alcoolisme, fortes
PRÉPARATION
ingestions d'aspirine.6, 7, 8, 9
R1, R2 et R3 sont prêts à être utilisés. Mélanger doucement avant utilisation.
3. Il a été démontré que des valeurs élevées de HbF peuvent conduire à une sous-
CONSERVATION ET STABILITÉ estimation de HbA1cet que l'urémie n'interfère pas dans la détermination de HbA 1c
par immunoessai.10 Il a également été démontré que des intermédiaires labiles (base
Tous les composants du kit sont stables jusqu'à la date d'expiration indiquée sur
de Schiff) ne sont pas détectés et n'interfèrent pas dans la détermination de HbA 1c
l'emballage, lorsque les flacons sont maintenus bien fermés à 2-8 ºC, et en évitant leur
contamination lors de leur utilisation. Ne pas utiliser de réactifs après leur date par immunoessai.5
d'expiration. 4. Il a été déterminé que les variantes d'hémoglobine HbA2, HbC et HbS n'interfèrent
R1 et R2, une fois ouverts, sont stables pendant au moins 1 mois s'ils sont conservés à pas par cette méthode.
2-8ºC. 5. D'autres variantes rares d'hémoglobine (ex. HbE) n'ont pas été évaluées-
Indicateurs de détérioration des réactifs : Altérations de l'aspect physique des réactifs
REMARQUES
ou valeurs de contrôle hors de la plage établie.
1. Afin d'éviter toute contamination, l'utilisation du matériel jetable est recommandée.
MATÉRIEL SUPPLÉMENTAIRE 2. Utilisez la pipette jetable propre pour la dispensation.
- Bain-marie à 37 ºC. 3. SPINREACT dispose de consignes détaillées pour l’application de ce réactif dans
- Spectrophotomètre ou photomètre avec cuvette thermostatable à 37 ºC pour lectures à différents analyseurs.
660 nm.
- Équipement habituel de laboratoire(Remarque 1). BIBLIOGRAPHIE
1. Trivelli, L.A., Ranney, H.M., and Lai, H.T., New Eng. J. Med. 284,353 (1971).
ÉCHANTILLONS 2. Gonen, B., and Rubenstein, A.H., Diabetologia 15, 1 (1978).
Aucune préparation particulière du patient ni de conditions spécifiques d'alimentation ne 3. Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F., and Gallop, P.M.,
sont nécessaires. Aucun additif ni conservateurs particuliers ne sont requis, à l'exception J. Clin. Endocrinol. Metab. 44, 859 (1977).
d'anticoagulants. Prélever le sang veineux avec de l'EDTA en utilisant des techniques 4. Bates, H.M., Lab. Mang., Vol 16 (Jan. 1978).
aseptiques. L'hémoglobine HbA1c dans le sang totale recueillie avec de l'EDTA est stable 5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders Company,
pendant une semaine à 2-8ºC.5 p.794-795 (1999).
Pour déterminer la HbA1c, il faut préparer un hémolysât pour chaque échantillon : 6. Ceriello, A., et al, Diabetologia 22, p. 379 (1982).
1. Distribuer 1 ml de Réactif hémolysant dans des tubes étiquetés : Calibrateur, 7. Little, R.R., et al, Clin. Chem. 32, pp. 358-360 (1986).
Contrôle, patients, etc. Remarque : Les tubes en plastique ou en verre de taille 8. Fluckiger, R., et al, New Eng.J. Med. 304 pp. 823-827 (1981).
appropriée sont valides. 9. Nathan, D.M., et al, Clin. Chem. 29, pp. 466-469 (1983).
2. Placer 20 µL de sang total bien mélangé dans un tube correctement étiqueté. 10. Engbaek, F., et al, Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989).
Mélanger. 11. American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations (Position
3. Laisser reposer pendant 5 minutes ou jusqu'à ce que la lyse complète soit évidente. Statement). Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001).
Les hémolysâts peuvent être conservés pendant 10 jours à 2-8 °C.
PRÉSENTATION
PROCÉDURE Cont.. Réf. 43099 Réf : 43100 Réf : 43101
1. Conditions d'essai: R1 : 1x15 mL 1 x 30 mL 1 x 90 mL
Longueur d'onde: 660 nm (600 – 660) R2 : 1x5 mL 1 x 10 mL 1 x 30 mL
Température : 37 ºC R3 : 1x60 mL 1 x 125 mL 4 x 125 mL
Passage de lumière de la cuvette. 1 cm
2. Ajuster le spectrophotomètre à zéro par rapport à l'eau distillée.
3. Pipeter dans une cuvette: (Remarque 2)
R1 (µL) 360
Calibrateur ou échantillon (µL) 10

TLIS50-F 29/09/20 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) ESPAGNE
Tél. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com
 HbA1c

Hemoglobina Glicosilada
Turbidimetria Látex

Determinação quantitativa da hemoglobina glicosilada (HbA 1c) em B B

CÁLCULOS
sangue humano UCConcentracão HbA1c (%)
Representar a absorbência (A) obtida perante as concentrações de HbA1c de cada
IVD Calibrador (do 1 ao 4). A concentração de HbA1c na amostra calcula-se por interpolação
Conservar a 2 - 8ºC. da sua absorbência (A) na curva de calibração.
PRINCIPIO DO MÉTODO CONTROLO DE QUALIDADE
Este método utiliza a interação de antigénio e anticorpo para determinar diretamente Recomenda-se utilizar soros controlo para controlar os ensaios tanto em procedimento
HbA1c em sangue total. A hemoglobina total e HbA1c têm a mesma absorção manual como em automático. Spinreact dispõe de soros controlo HbA1c (Ref:43106).
inespecífica para as partículas de látex. Quando se acrescenta o anticorpo monoclonal Os Controlos, uma vez reconstituídos, precisam de um tratamento hemolizante
anti- HbA1c (rato) (R2), forma-se o complexo latex- HbA1c - anticorpo HbA1c de rato. antes do seu uso.
Produz-se aglutinação quando o anticorpo policlonalIgG de cabra anti-rato interage com Cada laboratório deveria estabelecer o seu próprio Controlo de Qualidade e determinar
o anticorpo monoclonal. A quantidade de aglutinação é proporcional à quantidade de correções no caso de que os controlos não cumpram as tolerâncias exigidas.
HbA1c absorvida na superfície das partículas de látex. A quantidade de aglutinação
mede-se como absorbência. O valor de HbA1c é obtido da curva de calibração. VALORES DE REFERÊNCIA11
Valores recomendados: inferior a 6% para não-diabéticos, inferior a 7% para controlo
SIGNIFICADO CLÍNICO glicémico de pessoa com diabetes.
Ao longo da vida circulatória dos hematias, forma-se continuamente hemoglobina A1c, É recomendável que cada laboratório estabeleça os seus próprios valores de referência.
pela adição de glucose ao grupo N- terminal da cadeia beta da hemoglobina. Este No uso de Hemoglobina A1c para o controlo de pacientes diabéticos, os resultados
processo, que é não–enzimático, reflete a exposição média de hemoglobina a glucose devem ser interpretados individualmente. Significa que o paciente se deve controlar
durante um período prolongado. Num estudo clássico, Trivelliet al1 mostrou que a perante si mesmo. Há um intervalo de tempo de 3-4 semanas antes que Hemoglobina
Hemoglobina A1c aumenta 2-3 vezes em indivíduos com diabetes em comparação com A1c mostre mudanças no nível de glicose no sangue.
indivíduos normais. Vários investigadores recomendaram que a Hemoglobina A1c serve
como indicador do controlo metabólico de diabéticos, já que os níveis de Hemoglobina CARACTERÍSTICAS DO MÉTODO
A1c alcançam valores normais para diabéticos em controlo metabólico. 2,3,4 Intervalo de medição: Do limite de detecção de 2% até ao limite de linearidade de 16%
A Hemoglobina A1c foi definida como a ‘fração rápida’ de hemoglobina (Hb1A, A1B, A1c) Precisão:
que elui a primeira numa cromatografia de coluna com resinas de intercambio catiónico. Intra-ensaios (n=20) Inter-ensaios (n=20)
A hemoglobina não-glicosilada, que consiste na maior parte de hemoglobina, foi Média (mg/dL) 5,95 12,15 5,97 12,21
designada como HbA0. Este procedimento utiliza uma reação antígeno-anticorpo para SD 0,19 0,18 0,14 0,15
determinar diretamente a concentração de HbA1c . CV (%) 3,20 1,47 2,31 1,24
Sensibilidade analítica: 1 % = 0,056 (A).
REATIVOS Exactidão: Os resultados obtidos utilizando reagentes SPINREACT (y) não
demonstraram diferenças sistemáticas quando comparados com outros reagentes
R1 Latex 0,13%, Tampão, estabilizante. comerciais (x).
Anticorpo monoclonal anti-HbA1c (rato) 0,05 mg/mL, Os resultados obtidos com 40 amostras foram os seguintes:
R2 anticorpo policlonalIgG de cabra anti-rato 0,08 Coeficiente de correlação (r)2: 0,995.
mg/dL, tampão, estabilizantes. Equação de regressão: y=0,989x - 0,047.
Os resultados das características de desempenho dependem do analisador utilizado.
R3 (Reativo hemolizante) Água e estabilizantes
Ref: 43105 HbA1c CALIBRADOR (4 níveis). INTERFERÊNCIAS E LIMITAÇÕES
Opcional: 1. Bilirrubina até 50 mg/dL, ácido ascórbico até 50 mg/dL, triglicéridos até 2000 mg/dL,
Ref: 43106 HbA1c CONTROL (4 níveis).
Hbcarbamilada até 7,5 mmol/L e Hb acetilada até 5,0 mmol/L não interferem no
PRECAUÇÕES ensaio.
Todas as amostras humanas devem tratar-se como potencialmente bioperigosas. 2. Este ensaio não deve utilizar-se como único elemento para o diagnóstico de
Portanto, devem ser usadas as precauções universais de tratamento de amostras (luvas, diabetes mellitus. Devem ser considerados também outros testes para estabelecer
vestimenta de laboratório, evitar produção de aerossois, etc.)
um correto diagnóstico.
PREPARAÇÃO 3. As amostras de pacientes devem avaliar-se sempre usando curva de calibração.
R1, R2 e R3 estão prontos para o seu uso. Misturar suavemente antes de usar. 4. Os resultados podem ser inconsistentes em pacientes com as seguintes condições:
adição de opiáceos, envenenamento por chumbo, alcoolismo, grandes ingestões
CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE de aspirina.6, 7, 8, 9
Todos os componentes do kit são estáveis até à data de validade quando se mantêm os 5. Demonstrou-se que valores elevados de HbF podem levar a uma infra valoração
recipientes bem fechados a 2-8ºC, e se evita a contaminação durante o seu uso. Não de HA1c, e que a uremia não interfere com a determinação de HbA 1c por
utilizar reativos que tenham passado a data de validade. imunoensaio.10 Também se demonstrou que intermédios lábeis (base Schiff) não
Depois de abertos, R1 e R2 são estáveis durante pelo menos 1 mês caso se se são detetados e não interferem com a determinação de HbA1c por imunoensaio.5
conservem a 2-8ºC. 6. Determinou-se que as variantes de Hemoglobina HbA2, HbC e HbS não interferem
Indicadores de deterioração dos reativos: Alterações no aspeto físico dos reativos ou com este método.
valores dos controlos fora do intervalo estabelecido. 7. Não foram avaliadas outras variantes raras de hemoglobina (ex. HbE).

MATERIAL ADICIONAL NOTAS

- Banho de água a 37ºC. 1. Afin d'éviter tout contamination, l'utilisation du matériel jetable est recommandée
- Espetrofotómetro ou fotómetro com cuba termostatizável a 37ºC para leituras a 660 2. Utilizar pontas de pipeta descartáveis limpas para a sua dispensação.
nm. 3. A SPINREACT dispõe de instruções detalhadas para a aplicação deste
- Equipamento habitual de laboratorio.(Nota 1) reagente em diferentes analisadores.

BIBLIOGRAFIA
AMOSTRAS 1. Trivelli, L.A., Ranney, H.M., and Lai, H.T., New Eng. J. Med. 284,353 (1971).
Não é necessária uma preparação especial do paciente, nem condições de alimentação 2. Gonen, B., and Rubenstein, A.H., Diabetologia 15, 1 (1978).
específicas. Não requerem outros aditivos nem conservantes especiais além de 3. Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C., Bunn, H.F., and Gallop, P.M.,
anticoagulantes. Recolher o sangue venoso com EDTA usando técnicas asséticas. J. Clin. Endocrinol. Metab. 08008005000
HbA1c em sangue total recolhido com EDTA é estável durante uma semana a 2-8°C.5 4. Bates, H.M., Lab. Mang., Vol 16 (Jan. 1978).
Para determinar HbA1c, deve preparar-se um hemolizado para cada amostra: 5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders
1. Dispensar 1 mL de Reactivohemolizante em tubos etiquetados: Calibrador, Company, p.794-795 (1999).
Controlo, pacientes, etc. Nota: São válidos tubos de plástico ou vidro de tamanho 6. Ceriello, A., et al, Diabetologia 22, p. 379 (1982).
apropriado. 7. Little, R.R., et al, Clin. Chem. 32, pp. 358-360 (1986).
2. Colocar 20 µL de sangue total bem misturado no tubo corretamente etiquetado. 8. Fluckiger, R., et al, New Eng.J. Med. 304 pp. 823-827 (1981).
Misturar. 9. Nathan, D.M., et al, Clin. Chem. 29, pp. 466-469 (1983).
3. Deixar repousar durante 5 minutos ou até que seja evidente a lises completa. Os 10. Engbaek, F., et al, Clin. Chem. 35, pp. 93-97 (1989).
hemolizados podem conservar-se durante 10 dias a 2-8°C. 11. American Diabetes Association: Clinical Practice Recommendations (Position
Statement). Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001).
PROCEDIMENTO
1. Condições do ensaio: APRESENTAÇÃO
Comprimento de onda: 660 nm (600 – 660) Cont. Ref. 43099 Ref: 43100 Ref: 43101
Temperatura: - 37ºC
Passagem de luz da cuba: 1 cm R1: 1x15 mL 1 x 30 mL 1 x 90 mL
2. Ajustar o espetrofotómetro a zero perante água destilada. R2: 1x5 mL 1 x 10 mL 1 x 30 mL
3. Pipetear numa cuba: (Nota 2) R3: 1x60 mL 1 x 125 mL 4 x 125 mL
R1 (µL) 360
Calibrador ou amostra (µL) 10
4. Misturar e incubar 5 minutos.
5. Pipetear na mesma cuba:
R2 (µL) 120
6. Misturar e ler a absorbência (A2) depois de 5 minutos de adicionar o reativo R2.

TLIS50-P 29/09/20 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
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